準備工作:在使用前,將 CHT4-SD100-002 細胞計數(shù)板和蓋玻片用 75% 乙醇擦拭干凈,然后用無塵紙擦干,確保計數(shù)板表面無污漬和雜質(zhì)。同時,準備好細胞懸液,并根據(jù)細胞濃度進行適當稀釋,使細胞密度適中,便于計數(shù)。
加樣操作:將蓋玻片輕輕放置在計數(shù)板的凹槽上,確保蓋玻片與計數(shù)板緊密貼合,形成計數(shù)室。用微量移液器吸取適量的細胞懸液,將移液器的槍頭靠近計數(shù)室邊緣,緩慢滴加細胞懸液,使細胞懸液通過毛細作用自動充滿計數(shù)室。注意不要讓細胞懸液溢出計數(shù)室,也不要產(chǎn)生氣泡,以免影響計數(shù)結(jié)果。
顯微鏡觀察與計數(shù):將加樣后的計數(shù)板放置在顯微鏡載物臺上,先用低倍物鏡(如 10 倍物鏡)找到計數(shù)室的位置,然后轉(zhuǎn)換到合適的高倍物鏡(如 20 倍物鏡)進行觀察。按照計數(shù)原則,對計數(shù)室內(nèi)的細胞進行計數(shù),并記錄每個計數(shù)區(qū)域的細胞數(shù)量。
數(shù)據(jù)計算與分析:根據(jù)計數(shù)結(jié)果,使用上述計數(shù)公式計算細胞懸液的濃度。為了提高數(shù)據(jù)的準確性,可以對多個計數(shù)區(qū)域進行計數(shù),并計算平均值。同時,記錄實驗過程中的相關(guān)信息,如細胞來源、培養(yǎng)條件、稀釋倍數(shù)等,以便后續(xù)數(shù)據(jù)分析和實驗總結(jié)。
樣品處理:細胞懸液的制備質(zhì)量直接影響計數(shù)結(jié)果。在制備細胞懸液時,要確保細胞充分分散,避免細胞團聚。可以通過輕柔吹打、振蕩等方式使細胞均勻分布。同時,對于一些容易貼壁的細胞,在消化過程中要掌握好消化時間和消化液濃度,防止細胞損傷或消化。
加樣技巧:加樣時要注意操作手法,避免產(chǎn)生氣泡和液體溢出。如果計數(shù)室中出現(xiàn)氣泡,會導(dǎo)致計數(shù)區(qū)域內(nèi)細胞數(shù)量不準確;而液體溢出則會污染計數(shù)板和顯微鏡載物臺,影響后續(xù)實驗。此外,加樣后要靜置片刻,讓細胞沉降到計數(shù)室底部,再進行顯微鏡觀察,以獲得更準確的計數(shù)結(jié)果。
清潔與保養(yǎng):使用完畢后,立即將計數(shù)板和蓋玻片進行清洗。先用清水沖洗掉殘留的細胞懸液,然后用 75% 乙醇浸泡消毒,最后用無塵紙擦干并妥善保存。避免使用硬物刮擦計數(shù)板表面,防止損壞計數(shù)室的刻度和結(jié)構(gòu)。定期對計數(shù)板進行校準和檢查,確保其計數(shù)準確性。
生命科學(xué)研究:在細胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)等基礎(chǔ)研究領(lǐng)域,CHT4-SD100-002 細胞計數(shù)板被廣泛應(yīng)用于細胞培養(yǎng)、細胞增殖、細胞凋亡等實驗中的細胞數(shù)量測定。例如,在研究不同生長因子對細胞增殖的影響時,科研人員需要定期對細胞進行計數(shù),以繪制細胞生長曲線,評估生長因子的作用效果。
細胞治療:在細胞治療技術(shù)中,如 CAR-T 細胞治療、干細胞治療等,準確計數(shù)細胞是確保治療安全性和有效性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。通過使用細胞計數(shù)板,可以精確控制細胞的輸入劑量,避免因細胞數(shù)量過多或過少而導(dǎo)致的治療風險。
藥物研發(fā):在藥物篩選和藥效評價實驗中,細胞計數(shù)是評估藥物對細胞毒性和增殖抑制作用的重要指標。通過比較藥物處理前后的細胞數(shù)量變化,可以判斷藥物的活性和作用機制,為藥物研發(fā)提供重要的數(shù)據(jù)支持。
準確性高:CHT4-SD100-002 細胞計數(shù)板的精密結(jié)構(gòu)設(shè)計和標準化計數(shù)區(qū)域,減少了人為誤差,能夠提供較為準確的細胞計數(shù)結(jié)果。通過嚴格遵循計數(shù)方法和操作規(guī)范,多次重復(fù)計數(shù)取平均值,可以進一步提高數(shù)據(jù)的準確性和可靠性。
操作簡便:該計數(shù)板的使用方法相對簡單,無需復(fù)雜的儀器設(shè)備和專業(yè)技能培訓(xùn),科研人員和技術(shù)人員經(jīng)過短期培訓(xùn)即可掌握操作要點。在日常實驗和生產(chǎn)過程中,能夠快速完成細胞計數(shù)工作,提高工作效率。
成本效益好:與一些自動化細胞計數(shù)設(shè)備相比,CHT4-SD100-002 細胞計數(shù)板的價格較為親民,且使用壽命長,維護成本低。對于一些預(yù)算有限的實驗室和企業(yè)來說,是一種經(jīng)濟實用的細胞計數(shù)工具。
主觀性較強:在顯微鏡下進行細胞計數(shù)時,計數(shù)結(jié)果容易受到操作人員主觀因素的影響,如細胞識別能力、計數(shù)區(qū)域選擇等。不同操作人員對同一細胞懸液進行計數(shù),可能會得到不同的結(jié)果。因此,需要操作人員具備一定的經(jīng)驗和熟練的操作技能,并嚴格按照操作規(guī)范進行計數(shù)。
通量較低:CHT4-SD100-002 細胞計數(shù)板一次只能對少量樣本進行計數(shù),對于大規(guī)模的細胞計數(shù)需求,如高通量藥物篩選實驗,操作效率較低。在處理大量樣本時,需要耗費較多的時間和人力。
不適用于特殊細胞:對于一些體積較小、形態(tài)不規(guī)則或容易聚集成團的細胞,在顯微鏡下計數(shù)難度較大,可能會導(dǎo)致計數(shù)誤差。此外,對于一些含有雜質(zhì)或碎片的細胞懸液,也會影響細胞計數(shù)的準確性。在這種情況下,可能需要結(jié)合其他細胞計數(shù)方法或?qū)颖具M行進一步處理。