高效的 DNA 純化能力:通過大量實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 對 PCR 反應(yīng)體系中雜質(zhì)的去除。在對含有 100 nM 引物、200 μM dNTPs 的 PCR 產(chǎn)物進(jìn)行純化后,引物殘留量可降低至檢測限以下(< 1 nM ),dNTPs 殘留量減少 99% 以上 。經(jīng)純化的 DNA 樣本,A260/A280 比值穩(wěn)定在 1.8 - 2.0 之間,A260/A230 比值通常大于 2.0,滿足高通量測序、熒光定量 PCR 等對 DNA 純度要求下游實(shí)驗(yàn)需求 。
穩(wěn)定且高回收率表現(xiàn):針對不同長度的 PCR 擴(kuò)增子,該產(chǎn)品展現(xiàn)出良好的適應(yīng)性和高回收率。對于 100 - 500 bp 的 PCR 產(chǎn)物,在優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件下,回收率可達(dá) 90% - 95%;即使對于長達(dá) 5 kb 的 DNA 片段,回收率仍能保持在 80% 以上 。這一特性對于珍貴樣本的處理尤為重要,有效避免了因純化過程導(dǎo)致的樣本損失,為低起始量樣本的后續(xù)研究提供堅實(shí)保障。
高度靈活的操作模式:手動操作模式下,操作流程簡單易懂,適合實(shí)驗(yàn)室小規(guī)模樣本處理,單次可處理樣本量從 10 μL 到 1 mL 不等 。自動化操作模式下,與 Beckman、Hamilton 等多種品牌自動化液體處理工作站高度適配,通過預(yù)設(shè)程序可實(shí)現(xiàn) 96 孔板甚至 384 孔板的高通量樣本純化,大大提高實(shí)驗(yàn)效率。以 96 孔板為例,從樣本加載到獲得純化產(chǎn)物,全程僅需約 1 - 2 小時,相比手動操作效率提升數(shù)倍 。
出色的性能穩(wěn)定性:嚴(yán)格的生產(chǎn)工藝和質(zhì)量控制體系確保了產(chǎn)品在不同批次間的高度一致性。對連續(xù) 10 批次產(chǎn)品進(jìn)行性能測試,在相同實(shí)驗(yàn)條件下,DNA 純化后的純度和回收率波動范圍均控制在極小區(qū)間內(nèi),A260/A280 比值波動范圍 ±0.05,回收率波動范圍 ±3% 。這種穩(wěn)定的性能表現(xiàn),為科研實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性和可靠性提供了有力支撐。
創(chuàng)新的無離心過濾設(shè)計優(yōu)勢:傳統(tǒng) DNA 純化方法如乙醇沉淀法需多次離心,操作繁瑣且易導(dǎo)致 DNA 機(jī)械損傷;柱式純化法存在過濾堵塞風(fēng)險,影響純化效率和質(zhì)量。MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 采用磁珠分離技術(shù),避免離心和過濾步驟,不僅簡化實(shí)驗(yàn)流程,將純化時間從傳統(tǒng)方法的數(shù)小時縮短至 30 分鐘左右 ,還降低了樣本間交叉污染風(fēng)險,減少 DNA 因機(jī)械力或過濾作用造成的斷裂和損失,有助于獲得高質(zhì)量的 DNA 純化產(chǎn)物。
嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臏?zhǔn)備工作:實(shí)驗(yàn)前,所有器材需經(jīng)過嚴(yán)格清洗和滅菌處理。將 PCR 反應(yīng)產(chǎn)物置于冰上保存,防止 DNA 降解。充分振蕩磁珠懸浮液至少 30 秒,使磁珠均勻分散,避免因磁珠沉淀導(dǎo)致取用不均影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。檢查結(jié)合緩沖液、洗滌緩沖液和洗脫緩沖液是否在有效期內(nèi),確保其性能穩(wěn)定。
精確的結(jié)合步驟:取適量 PCR 反應(yīng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至 1.5 mL 離心管,按照 1:1 體積比加入結(jié)合緩沖液,使用移液器反復(fù)吹打 10 - 15 次,確保充分混勻。根據(jù) PCR 產(chǎn)物體積,按每 100 μL 產(chǎn)物加入 20 - 30 μL 磁珠懸浮液的比例添加磁珠,再次充分混勻后,室溫孵育 8 分鐘,使 DNA 與磁珠充分結(jié)合 。孵育過程中,可輕微顛倒離心管數(shù)次,促進(jìn)結(jié)合反應(yīng)進(jìn)行。
細(xì)致的分離與洗滌:將離心管置于磁力架上,靜置 1.5 分鐘,待磁珠聚集后,使用移液器小心移除上清液,注意吸頭與磁珠沉淀保持一定距離,避免吸走磁珠 。向離心管中加入 500 μL 洗滌緩沖液,用移液器輕柔吹打 5 - 8 次,使磁珠重新懸浮,室溫靜置 1 分鐘后,再次置于磁力架上,移除上清液。重復(fù)洗滌步驟 2 次,確保磁珠表面雜質(zhì)清除。
精準(zhǔn)的洗脫操作:將離心管從磁力架上取下,加入 30 - 50 μL 洗脫緩沖液或去離子水,用移液器輕輕吹打使磁珠均勻懸浮,室溫孵育 3 分鐘,使 DNA 充分洗脫 。將離心管再次置于磁力架上,靜置 1 分鐘,待磁珠聚集后,將含有純化 DNA 的上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中,避免吸入磁珠,即獲得純化后的 PCR 產(chǎn)物。
設(shè)備與試劑的精細(xì)準(zhǔn)備:根據(jù)自動化液體處理工作站型號,嚴(yán)格按照操作手冊進(jìn)行設(shè)備初始化,檢查機(jī)械臂運(yùn)動軌跡、移液器吸頭安裝情況以及試劑管路連接是否正常。將 MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 試劑分別準(zhǔn)確裝載到工作站的相應(yīng)試劑槽,確保試劑無氣泡、無泄漏。準(zhǔn)備好 PCR 反應(yīng)產(chǎn)物板和用于收集純化后 DNA 的微孔板,放置在工作站指定位置。
科學(xué)的方法編輯:在工作站控制軟件中,依據(jù)產(chǎn)品說明書和實(shí)驗(yàn)需求,精確設(shè)置各試劑添加體積、混合速度與時間、孵育溫度和時間、磁力分離時間以及洗脫步驟等參數(shù) 。例如,結(jié)合緩沖液添加體積設(shè)置為與 PCR 產(chǎn)物等體積,磁珠懸浮液添加比例按照每 100 μL 產(chǎn)物添加 25 μL 設(shè)定,結(jié)合孵育時間設(shè)為 8 分鐘,磁力分離時間每次設(shè)為 1.5 分鐘等 。同時,設(shè)置好樣本轉(zhuǎn)移路徑和液體處理順序,確保實(shí)驗(yàn)流程的科學(xué)性和準(zhǔn)確性。
穩(wěn)定的運(yùn)行實(shí)驗(yàn):啟動自動化程序后,密切監(jiān)控工作站運(yùn)行狀態(tài),觀察試劑添加、混合、孵育、磁力分離等操作是否正常進(jìn)行 。實(shí)驗(yàn)過程中,若出現(xiàn)吸頭堵塞、試劑不足等異常情況,及時暫停程序,按照操作規(guī)程進(jìn)行處理。實(shí)驗(yàn)完成后,小心取出含有純化 DNA 的微孔板,可直接用于下游實(shí)驗(yàn)分析。
磁珠懸浮液使用前務(wù)必充分混勻,但避免劇烈振蕩產(chǎn)生過多氣泡,影響磁珠分散和結(jié)合效果 。若磁珠出現(xiàn)團(tuán)聚現(xiàn)象,可適當(dāng)延長振蕩時間或使用渦旋振蕩器輕柔振蕩,使其恢復(fù)均勻分散狀態(tài)。
移液器操作需嚴(yán)格規(guī)范,定期校準(zhǔn)移液器,確保各試劑添加體積準(zhǔn)確無誤。吸取和轉(zhuǎn)移磁珠懸浮液時,盡量避免產(chǎn)生氣泡,防止磁珠掛壁或殘留于吸頭內(nèi),影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性。
手動洗滌步驟中,移除上清液時動作要輕緩,確保磁珠沉淀不受擾動。自動化操作時,定期檢查移液器吸頭安裝牢固性,防止吸頭在實(shí)驗(yàn)過程中脫落,導(dǎo)致樣本污染或?qū)嶒?yàn)失敗。
不同來源的 PCR 產(chǎn)物,其模板 DNA 質(zhì)量、引物濃度、dNTPs 用量等存在差異,大規(guī)模實(shí)驗(yàn)前務(wù)必進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),優(yōu)化磁珠用量、結(jié)合與洗脫條件等參數(shù) 。例如,對于高濃度 PCR 產(chǎn)物,可適當(dāng)增加磁珠用量或延長結(jié)合時間;對于 GC 含量高的 DNA 片段,可調(diào)整洗脫緩沖液成分或溫度,提高洗脫效率。
產(chǎn)品中的各種緩沖液應(yīng)嚴(yán)格按照儲存條件保存,通常置于 4℃冰箱避光保存。若發(fā)現(xiàn)緩沖液出現(xiàn)渾濁、沉淀、變色等異常情況,嚴(yán)禁使用,及時更換新試劑,避免影響 DNA 純化效果。
下一代測序(NGS)文庫制備的關(guān)鍵環(huán)節(jié):在全基因組測序、外顯子組測序、轉(zhuǎn)錄組測序等 NGS 應(yīng)用中,MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 對文庫片段的純化至關(guān)重要。以全基因組測序文庫制備為例,PCR 擴(kuò)增后的文庫中含有大量引物二聚體、接頭二聚體等雜質(zhì),這些雜質(zhì)會降低測序通量和數(shù)據(jù)質(zhì)量 。使用該產(chǎn)品純化后,可有效去除雜質(zhì),使文庫中目標(biāo) DNA 片段占比從純化前的 60% - 70% 提升至 90% 以上 ,顯著提高測序質(zhì)量和效率。同時,其精確的片段大小選擇能力,能夠篩選出符合測序儀要求的 DNA 片段(如 Illumina 測序平臺通常要求文庫片段長度在 200 - 500 bp ),避免短片段或長片段對測序結(jié)果的干擾,為基因組學(xué)研究提供高質(zhì)量的測序數(shù)據(jù)。
Sanger 測序的質(zhì)量保障:在傳統(tǒng) Sanger 測序中,PCR 產(chǎn)物純度直接影響測序準(zhǔn)確性。對于未知基因片段測序,樣本中雜質(zhì)可能導(dǎo)致測序峰圖出現(xiàn)雜峰、信號弱等問題。MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 能夠高效去除 PCR 反應(yīng)體系中的雜質(zhì),獲得高純度 DNA 模板。經(jīng)純化后的 PCR 產(chǎn)物用于 Sanger 測序,測序峰圖清晰,堿基識別準(zhǔn)確率從使用未純化產(chǎn)物時的 90% - 95% 提升至 98% 以上 ,有效減少測序錯誤,提高基因序列分析的可靠性。
基因突變檢測與基因分型的可靠工具:在腫瘤基因檢測領(lǐng)域,MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 可用于肺癌 EGFR 基因、乳腺癌 BRCA1/2 基因等突變位點(diǎn)的檢測。從患者血液、組織等樣本中提取 DNA 進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增后,利用該產(chǎn)品純化產(chǎn)物,能夠去除樣本中可能存在的雜質(zhì)和背景 DNA 干擾,提高檢測靈敏度 。例如,在檢測 EGFR 基因 T790M 突變時,可將檢測下限從傳統(tǒng)方法的 1% - 2% 降低至 0.1% - 0.5% ,有助于早期發(fā)現(xiàn)腫瘤微小殘留病灶,為腫瘤患者的個性化治療方案制定和預(yù)后評估提供準(zhǔn)確依據(jù)。在遺傳疾病基因分型方面,如囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子(CFTR)基因突變檢測,可準(zhǔn)確區(qū)分野生型和突變型基因,為遺傳疾病的診斷和產(chǎn)前篩查提供可靠保障。
病原體檢測的高效手段:在病毒、細(xì)菌、真菌等病原體檢測中,臨床樣本中病原體核酸含量通常較低,且存在大量宿主 DNA 等雜質(zhì)。MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 可有效純化 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物,富集病原體 DNA 片段。以病毒(SARS - CoV - 2)檢測為例,從咽拭子、痰液等樣本提取 RNA 反轉(zhuǎn)錄為 cDNA 后進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增,經(jīng)該產(chǎn)品純化,可去除樣本中宿主 RNA、蛋白質(zhì)等雜質(zhì),提高檢測特異性 。在實(shí)際臨床檢測中,相比未純化樣本,使用純化后樣本進(jìn)行檢測,陽性檢出率提高 10% - 15% ,為疫情防控和感染性疾病診斷提供快速、準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。
重組蛋白表達(dá)與純化質(zhì)量控制核心環(huán)節(jié):在重組蛋白表達(dá)載體構(gòu)建過程中,MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 用于對 PCR 擴(kuò)增的目的基因片段進(jìn)行純化,確保載體構(gòu)建準(zhǔn)確性。例如,在構(gòu)建胰島素表達(dá)載體時,對胰島素基因片段進(jìn)行純化,可去除引物、dNTPs 等雜質(zhì),提高載體連接效率,使重組質(zhì)粒陽性率從使用未純化片段時的 60% - 70% 提升至 85% - 90% 。在重組蛋白表達(dá)后的純化過程中,該產(chǎn)品可檢測和去除宿主 DNA 殘留,降低宿主 DNA 對重組蛋白產(chǎn)品質(zhì)量和安全性的潛在風(fēng)險,確保重組蛋白產(chǎn)品符合 GMP 要求,保障藥品質(zhì)量。
疫苗研發(fā)與生產(chǎn)質(zhì)量保障:在核酸疫苗(如 mRNA 疫苗)研發(fā)和生產(chǎn)中,高質(zhì)量的核酸模板是關(guān)鍵。MAGBIO HighPrep PCR AC - 60050 用于純化 PCR 擴(kuò)增的 mRNA 編碼序列,去除雜質(zhì)和副產(chǎn)物,獲得高純度核酸模板 。經(jīng)純化的核酸模板用于體外轉(zhuǎn)錄合成 mRNA,可提高 mRNA 合成效率和質(zhì)量,使 mRNA 純度從純化前的 80% - 85% 提升至 95% 以上 ,確保疫苗有效性和安全性。在病毒載體疫苗生產(chǎn)中,對載體 DNA 進(jìn)行純化,可去除宿主細(xì)胞 DNA 殘留,降低免疫原性,保障疫苗產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定性。